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探討液氮冷凍法制備家兔股骨頭壞死

點擊次數:2604 更新時間:2017-05-15

探討液氮冷凍法制備家兔股骨頭壞死

1材料與方法

1.1實驗動物:10只成年新西蘭大白兔,雌雄不限,年齡4~5個月,體質量2.5~3.5kg。

1.2實驗方法:所用動物的雙側股骨頭均參加實驗,將動物俯臥位固定,取髖關節后側切口,暴露關節囊并十字切開,內旋股骨,顯露股骨頭的負重區,在不切斷股骨頭(圓)韌帶,髖關節不造成脫位的基礎上,保護周圍組織,以液氮棉團連續快速冷凍股骨頭8次,共約3min,關閉手術切口。術后肌肉注射慶大霉素,以預防術后感染。

1.3股骨頭標本的制作和觀察:實驗動物在麻醉下,分別于術后3、7d各處死1只,術后2、4、6、8周各處死2只,進行股骨頭標本的大體解剖學觀察和X線檢查。經10%甲醛溶液固定股骨頭標本,用8%甲酸溶液脫鈣處理,石蠟包埋,組織切片,HE染色后,進行光鏡觀察和攝像。

2結果

2.1股骨頭標本的大體觀察:造模3d的股骨頭標本,外形圓而光滑,關節軟骨呈蒼白色,7d的標本與3d情況無明顯區別。2周時,股骨頭外形圓滑,有2例標本關節軟骨面出現少許剝脫,關節軟骨呈蒼白色;4周時,有3例股骨頭標本關節面出現輕度塌陷,所有關節軟骨均有輕度剝脫。6周時,股骨頭外形仍呈圓形,關節軟骨剝脫加重。8周時,關節軟骨呈蒼白色,剝脫嚴重,關節軟骨下有骨暴露,并有1例失去其圓形輪廓,呈現骨性關節炎樣改變(圖1)。

2.2股骨頭標本的X線觀察:造模3d的股骨頭外形圓,骨密度無明顯變化,骨小梁結構正常;7d時的標本,X線表現與3d時無明顯差別。2周時,股骨頭外形圓,骨密度有所增加,骨小梁結構完整。4周時,有3例股骨頭輕度變扁,并有骨刺樣結構形成,骨密度增加,骨小梁結構出現紊亂(圖2)。6周時,股骨頭外形圓,骨密度明顯增加,骨小梁結構變得紊亂,出現軟骨下囊性變。8周時,股骨頭標本外形圓,骨密度高,骨小梁結構紊亂,軟骨下呈囊性變;有1例股骨頭標本,正常外形喪失、變小。

2.3股骨頭標本的組織學觀察:在造模3d時的股骨頭組織切片上,冷凍區和周圍部的軟骨細胞出現壞死,骨細胞和骨髓組織也呈現壞死,遠離冷凍區的骨組織壞死較輕。關節軟骨表面光滑,骨小梁結構正常,骨陷窩空虛。7d時的標本和3d時無明顯區別。2周時,可見骨髓纖維化,并有骨髓基質細胞,出現于壞死的骨小梁周圍(圖3)。有2例股骨頭標本,關節軟骨下有較多的破骨細胞聚集(圖4)。關節軟骨表面輕度毛糙,部分軟骨細胞呈灶性增生,并出現爬行修復現象(圖5)。骨小梁結構完整,骨陷窩空虛,骨小梁周圍出現附加骨組織(圖6),在部分標本的骨小梁間,有新生類骨質形成。4周時,出現骨髓增生,骨組織修復比2周時更加活躍,骨小梁和新生類骨質較2周時更為增多。關節軟骨表面毛糙,部分出現剝脫。有少數的骨小梁變細或出現折痕,骨陷窩空虛;有3例股骨頭標本,軟骨下骨組織修復旺盛,軟骨下的骨小梁變細、形態不規則或出現折痕(圖7),甚至出現股骨頭關節面的塌陷(圖8)。6周時,骨組織修復繼續進行,部分軟骨剝脫,軟骨下出現骨暴露。骨小梁變細,出現折痕或吸收現象;骨陷窩空虛,骨小梁附加骨和新生類骨質較多。8周時,關節軟骨剝脫嚴重,骨小梁紊亂,骨陷窩空虛,出現大量的骨小梁附加骨和新生類骨質。

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